Stage 4 : Ligature et Transformation

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Les substrats des ligases

Alors que la sortie Escherichia coli ligase isolée spécifiquement liée à des liaisons phosphodiester ouvertes décalées sur les deux brins d'ADN, la ligase T4 du bactériophage T4 lie également des fragments d'ADN linéaires à double brin sans surplomber les zones simple brin, ce que l'on appelle émoussé-Ligature. Cependant, 30 fois la quantité de ligase est nécessaire pour une telle réaction.

Noter: Seule l'ADN ligase des phages (T4 ou T7) permet une combinaison illimitée de fragments d'ADN d'origines différentes pour la production d'ADN recombinant.

Tab.1: Substrats des ADN ligases

Substrat	Explication
	Cette cassure simple brin (pseudo) peut également être utilisé par le E. coli-Ligase détecté et réparé.
	Ici peut le E. coliLes ligas ne fonctionnent plus à la température optimale, car cette structure à 37 $°C$ est déjà instable.
	Une situation biotechnologiquement souhaitée qui est reconnue par la ligase du phage. Le 5'-OH coloré en rouge appartient au vecteur dans les expériences de clonage et empêche le vecteur de s'auto-ligaturer. Le reste pseudoest réparé dans la cellule.
	Bout émoussé Ligature ! Difficile, mais toujours faisable pour le phage ligase.