Chimie

Cours pratique 5 : PCR inverse - délétion de segments de gènes

Cours pratique 5 : PCR inverse - délétion de segments de gènes


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Une nouvelle idée et son application

La découverte de la réaction en chaîne par polymérase, ou PCR en abrégé, est devenue indispensable en médecine, en biologie moléculaire et en génétique. Au lieu d'isoler laborieusement les plus petites quantités de matériel génétique d'une cellule, le matériel génétique est maintenant rapidement, automatisé et reproduit en n'importe quelle quantité dans le tube à essai.

Personne élément non traité en mode blocktype.

Un vendredi soir, je conduisais, comme c'était mon habitude, de Berkeley jusqu'à Mendocino où j'avais une cabane loin de tout dans les bois. Ma petite amie, Jennifer Barnett, quelle endormie. Je pensais. Puisque les oligonucléotides n'étaient plus si difficiles à fabriquer, ne serait-il pas assez simple d'en mettre deux dans la réaction au lieu d'un seul de sorte que l'un d'eux se lie au brin supérieur et l'autre au brin inférieur avec leurs trois prime se termine à côté des bases opposées de la paire de bases en question. Si l'un était plus long que l'autre, alors leurs produits d'extension à base unique pourraient être séparés les uns des autres sur un gel et l'un pourrait servir de contrôle pour l'autre. J'allais devoir les séparer sur un gel de toute façon du grand excès de nucléoside triphosphate radioactif. ... Il était sur le point de me conduire à la PCR.

Extrait de la conférence Nobel du 8 décembre 1993.

En 1983, Kary B. Mullis, un scientifique aussi ingénieux que légèrement farfelu, renoue avec une vieille idée du postdoctorant norvégien Kjell Kleppe (à l'époque dans le laboratoire de HG Khorana) : répliquer l'ADN à l'aide de deux flanquants amorces. Sur la base de cette idée, Mullis a développé une toute nouvelle méthode de synthèse d'ADN dans laquelle l'ADN est copié maintes et maintes fois par doublement répété en plusieurs cycles à l'aide d'une enzyme, l'ADN polymérase. Pour cette réaction en chaîne par polymérase (anglais réaction en chaîne par polymérase, PCR), Mullis a reçu le prix Nobel de chimie 1993 en 1993.

Cette technologie, initialement très lourde et dans laquelle une nouvelle polymérase devait être ajoutée à chaque cycle, a été considérablement simplifiée par la découverte d'enzymes thermostables à partir d'archébactéries thermophiles. Uniquement via des polymérases spéciales telles que la Taq polymérase Thermus aquatique Il est devenu possible d'automatiser les séquences de processus PCR.

Dans les pages suivantes, un certain nombre de domaines d'application différents de la PCR sont présentés, ce qui donne un petit aperçu de la diversité des utilisations possibles de cette technologie aujourd'hui (à partir de 2012). Qu'il s'agisse d'analyses génétiques en médecine, de tests médico-légaux en pathologie, d'analyses biologiques moléculaires ou biochimiques, bon nombre de ces méthodes de test ne seraient pas possibles sans la PCR.


Vidéo: PCR Polymerase Chain Reaction (Juillet 2022).


Commentaires:

  1. Vozilkree

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  2. Doru

    Il n'y a pas de tel

  3. Brademagus

    Je suis désolé, mais à mon avis, vous avez tort. Je propose d'en discuter.

  4. Ulfred

    Je considère que le thème est plutôt intéressant. Je suggère à tous de participer à la discussion plus activement.

  5. Zahur

    frais

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    Écouter.



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