Chimie

Préparation au stage de génie génétique

Préparation au stage de génie génétique


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Inoculation d'un milieu nutritif

Les bactéries sont cultivées en culture sous agitation dans des milieux liquides (par exemple dans un tube à essai ou dans un erlenmeyer) ou sur des milieux de culture solides (plaques de gélose) dans un incubateur. La température de croissance optimale pour les bactéries intestinales telles que E. coli a 37 ans °C, tandis que les germes de l'air ou du sol préfèrent des températures plus basses dans la plupart des cas. Cette température de croissance optimale doit être maintenue si possible, sinon les bactéries ne se multiplieront que lentement.

Pour produire des cultures pures, les cellules bactériennes sont placées sur une plaque de gélose de manière à former idéalement des colonies uniques. Une seule colonie a émergé d'une seule bactérie, on peut donc supposer que toutes les bactéries de cette colonie sont génétiquement identiques. Une seule colonie peut être obtenue, par exemple, par un frottis de dilution ou en étalant une dilution appropriée de la culture liquide.

Une seule colonie est ensuite transférée (ensemencée) de la plaque de gélose dans un tube de culture étiqueté avec une pipette en verre stérile ou une boucle d'inoculation flambée et incubée à la température de croissance optimale. La multiplication des bactéries dans le tube de culture peut être suivie à l'œil par une nébulosité croissante et quantifiée à l'aide de la densité optique à 600 nm.

Si un antibiotique est ajouté au liquide de culture, les bactéries de la colonie ne peuvent se multiplier que si elles ont la résistance appropriée aux antibiotiques. Cette culture sélective peut être utilisée pour permettre uniquement aux bactéries recombinantes souhaitées de se développer après le clonage.

Noter
Un conseil pour la pratique : Si les plaques de gélose sont toujours étiquetées sur le fond de la plaque (et non sur le couvercle), le risque de confusion est considérablement réduit si différents lots tests sont utilisés en parallèle !


Vidéo: 3ème sciencesExp. SVT. isolement et repérage du gène (Juin 2022).