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Chromatographie d'échange d'ions : une introduction
- Chromatographie d'échange d'ions
- La chromatographie par échange d'ions est une forme de chromatographie liquide dans laquelle les substances ioniques ou ionisables sont séparées en fonction de leur interaction avec le matériau de la colonne chargée.
Comme avec d'autres types de chromatographie, une phase stationnaire (le matériau de la colonne) et une phase mobile (le tampon) sont également utilisées ici, la phase stationnaire portant des groupes ionisables liés de manière covalente. Ces charges fixes sont neutralisées par des ions mobiles de charge opposée.
La chromatographie par échange d'ions est un processus en deux étapes :
- Liaison des protéines aux groupes chargés du matériau de la colonne
- Elution des protéines liées par déplacement
Dans la première étape, les protéines déplacent l'ion mobile précédemment lié du tampon de fonctionnement ; dans la deuxième étape, les protéines liées sont déplacées par un autre ion mobile avec une affinité plus élevée pour les groupes chargés du matériau de la colonne et s'éluent. Plus une protéine est chargée, mieux elle se liera au matériau de la colonne de charge opposée. L'un des facteurs les plus importants de la chromatographie par échange d'ions est le pH du tampon, car il détermine la charge nette de la protéine et du matériau de la colonne. Si le pH est proche du point isoélectrique de la protéine, la protéine ne se lie que faiblement. Le deuxième facteur important est la concentration en sel du tampon utilisé pour éluer la protéine de la colonne. Si la concentration en sel est faible, les protéines qui ne se lient que faiblement au matériau de la colonne seront éluées en premier ; si la concentration en sel est élevée, les autres protéines seront également éluées.
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