Chimie

Purification et précipitation des protéines

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Dialyse des protéines

Lors de l'isolement des protéines, un échange de tampon doit être effectué dans de nombreux cas, par exemple si le sel doit être éliminé après une précipitation au sulfate d'ammonium (dessalement) ou plusieurs méthodes chromatographiques avec différents tampons doivent être utilisées l'une après l'autre ( rebuffade).

définition
Pendant la dialyse, des substances de faible poids moléculaire sont retirées de la solution de protéines ou d'autres sont ajoutées. Toutes les méthodes de dialyse utilisent des membranes semi-perméables qui laissent passer les sels inorganiques et autres composés de faible poids moléculaire, en fonction du volume d'exclusion (volume de coupure) mais ne peut pas être transmis par les protéines.

Les membranes de dialyse conventionnelles en cellulose ont un volume d'exclusion d'environ 10 000 , c'est-à-dire des protéines avec des masses moléculaires supérieures à 10 000 ne peut traverser cette membrane que très lentement ou que dans une très faible mesure. Le volume d'exclusion des membranes cellulosiques peut être compris entre 1 et 50 kDA.

Les tubes de dialyse secs doivent d'abord être réhydratés avant utilisation. Cela se fait en faisant bouillir dans des solutions, qui sont souvent 10 mmolL.-1 L'EDTA est ajouté pour complexer tous les ions de métaux lourds qui peuvent être présents avant qu'ils ne soient rincés plusieurs fois avec de l'eau distillée. Lors de son utilisation, il est également important de considérer si, en raison de la concentration de la solution de protéines, de l'eau peut éventuellement pénétrer dans le tube de dialyse et éventuellement provoquer son éclatement. Le tuyau ne doit pas être trop rempli. Le volume du tampon de dialyse doit être d'environ 200 fois celui de la solution protéique ; la dialyse est généralement réalisée en chambre froide sur un agitateur magnétique. Pour accélérer le processus de dialyse, le tampon doit être remplacé plusieurs fois par un nouveau tampon. La dialyse peut être utilisée non seulement pour dessaler ou retamponner, mais aussi pour concentrer un échantillon. Dans ce cas, la solution de protéines est comparée à une solution de PEG à 10-20 % (p/v) (forme moléculaire élevée, masse moléculaire d'environ 7 500 ) dialysé jusqu'à ce que la réduction de volume souhaitée se produise.

Au lieu de dessaler ou de re-tamponner un échantillon par dialyse, une filtration sur gel ou une ultrafiltration peuvent également être effectuées. La dialyse, cependant, a l'avantage de pouvoir être effectuée avec beaucoup moins d'équipement et moins de temps et d'efforts.


Vidéo: Proteiinisynteesi yleisesti (Juillet 2022).


Commentaires:

  1. Duhn

    À mon avis, vous commettez une erreur. Discutons. Écrivez-moi dans PM.

  2. Finnegan

    Prêt à débattre sur le sujet ?



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