Chimie

Repliement des protéines

Repliement des protéines


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Corps d'inclusion

Les corps d'inclusion sphériques parfois formés lors de l'expression d'une protéine étrangère ont en E. coli0,2 à 1,5 µm de diamètre et, dans certains cas, font littéralement gonfler la cellule bactérienne. En règle générale, il n'y a qu'un seul corps d'inclusion par cellule bactérienne, celui-ci n'est jamais lié à la membrane et présente une structure plutôt poreuse.

La protéine dans les corps d'inclusion est généralement complètement synthétisée, mais n'est que partiellement repliée. Dans certains cas, une proportion étonnamment élevée de la structure protéique native est préservée : avec la -glucosidase jusqu'à 30 %, avec l'endoglucanase presque 100 % de la protéine présente dans le corps d'inclusion peut être présente dans une conformation active. Néanmoins, dans la plupart des cas, une dénaturation complète de la protéine est nécessaire afin d'amener les protéines dans une solution à partir de laquelle elles peuvent ensuite être à nouveau renaturées. La première étape pour isoler cette protéine est la récupération des corps d'inclusion, suivie de la dissolution des agrégats de protéines. La protéine dans les corps d'inclusion est principalement insoluble dans le sel ou les détergents non ioniques, de sorte que les détergents ioniques tels que 1% SDS et les dénaturants tels que l'urée 8 M ou la guanidine 6 M / HCl sont principalement utilisés pour la solubilisation.

Comment empêchez-vous le dépôt de protéines dans les corps d'inclusion ?

Il ne semble pas y avoir de corrélation directe entre la formation de corps d'inclusion et le type de protéine. Wilkinson et Hamson ont trouvé une faible corrélation avec les propriétés de charge ou de repliement, car la tendance à former des corps d'inclusion augmente légèrement avec des protéines à forte proportion de Cys ou de Pro ou avec des protéines fortement hydrophobes. La protéine exprimée de manière homologue ou hétérologue est rarement déposée à 100 % dans les corps d'inclusion, la plupart du temps une partie non négligeable de la protéine est soluble dans le cytoplasme de la cellule hôte. Cette proportion de protéines solubles peut être augmentée grâce à quelques astuces :

  1. Abaissement de la température de croissance : L'interaction hydrophobe des protéines diminue avec la diminution de la température et les protéines ont plus de temps pour reprendre leur conformation native. Cependant, il y a des limites à l'abaissement de la température, car la bactérie hôte peut ne plus pouvoir croître ou ne croître que très lentement à cette température.
  2. Expression conjointe avec chaperons : GroEL, GroES, DnaK et HtpG sont des protéines qui aident d'autres protéines à se replier correctement. Ces protéines sont évolutivement très fortement conservées et peuvent être trouvées dans tous les organismes, c'est pourquoi les chaperons procaryotes, par exemple, sont tout à fait utiles dans une cellule hôte bactérienne, même si une protéine eucaryote étrangère doit être synthétisée. Par exemple, la co-expression de DnaK augmente la fraction soluble du facteur de croissance humain (HGF) dans E. coli jusqu'à 87 % (Blum et al., 1992).
  3. Stress osmotique : croissance en présence de glycyl bétaïne (glycine bétaïne) et de sorbitol. Le sorbitol est nécessaire pour pouvoir absorber la glycylbétaïne dans les cellules, et la glycylbétaïne stabilise la production nouvellement synthétisée de protéines de fusion : la fusion de la protéine avec la thiorédoxine augmente la stabilité (et donc la proportion de la fraction soluble) de certains mammifères. cytokines et facteurs de croissance dans le système hétérologue.

Littérature

Blum, P.; Velligan, M.; Lin, N.; Matin, A. (1992):Altérations médiées par l'ADNK dans les corps d'inclusion des protéines de l'hormone de croissance humaine. . Dans: Biotechnologie . 10, 301-4
Wilkinson, D.L.; Harrison, R.G. (1991):Prédire la solubilité des protéines recombinantes dans Escherichia coli.. Dans: Biotechnologie. 9, 443-8


Vidéo: Torstaitipsit: Top 6 proteiinin lähteet (Juin 2022).