Chromatographie

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Détecteur de fluorescence en HPLC

Le détecteur de fluorescence est également l'un des détecteurs spectroscopiques en HPLC. Cependant, il est jusqu'à 1000 fois plus sensible que le détecteur UV/VIS et répond sélectivement aux composés qui sont excités à la fluorescence ou qui peuvent être convertis en dérivés influorescents par une conversion appropriée.

Principe de détection

Le détecteur de fluorescence doit sa plus grande sensibilité au détecteur UV/VIS à un principe de mesure différent - la mesure d'émission. Aucune différence entre deux intensités lumineuses n'est mesurée, mais un rayonnement émis, le signal de fond étant réellement nul lorsqu'aucun fluorophore n'est présent.

L'intensité de fluorescence peut être déterminée à l'aide de l'équation suivante :

F. = 2,3 \cdot JE. \cdot ?? \cdot c \cdot je \cdot ??

Légende

$JE.$	-	Intensité de la lumière d'excitation
$??$	-	Coefficient d'absorption
$c$	-	concentration
$je$	-	Longueur du trajet du faisceau lumineux à travers l'échantillon
$??$	-	Rendement quantique de la substance

Quels liens peut-on prouver ?

Des composés cycliques principalement conjugués peuvent être détectés :

composés aromatiques polynucléaires
Des substituants sur l'aromatique peuvent conduire à l'extinction de la fluorescence (-COOH, -NO₂, groupes SH)

En plus des substituants sur le corps aromatique, la phase mobile ( $pH$ valeur, viscosité) et la température influencent le comportement de fluorescence de l'échantillon. Ils doivent donc être adaptés à la méthode de détection.

Tab.1: Détecteur de fluorescence

avantages	désavantage
▪ détection sélective ; tous les éluants couramment utilisés en HPLC ne sont pas des fluorophores, pratiquement aucune restriction dans la sélection ; ▪ bien adapté à l'élution en gradient ; ▪ les substances ne sont pas détruites	▪ Dépendance à la température (mais seulement faible) ▪ Les composants de l'éluant peuvent conduire à l'extinction du rayonnement émis